中低壓制備柱的工作原理是其核心所在。它主要依據(jù)物質(zhì)在固定相和流動相之間的分配系數(shù)差異來實現(xiàn)分離。當(dāng)樣品混合物隨著流動相進(jìn)入制備柱時，不同的組分與固定相之間發(fā)生不同程度的相互作用。一些組分對固定相的親和力較強(qiáng)，在柱內(nèi)停留時間較長；而另一些組分則與流動相的親和力更大，會較快地隨著流動相流出。通過這種差異，各組分在柱內(nèi)逐漸分層，實現(xiàn)彼此的分離。例如，在凝膠過濾色譜中，利用凝膠的分子篩作用，根據(jù)分子大小對物質(zhì)進(jìn)行分離。較小的分子可以進(jìn)入凝膠內(nèi)部的孔隙，而較大的分子則被排斥在外，從而使得不同大小的分子在柱內(nèi)以不同的速度移動，達(dá)到分離的目的。
從結(jié)構(gòu)上看，中低壓制備柱通常由柱管、固定相、接頭等部分組成。柱管是制備柱的外殼，一般由耐腐蝕、耐壓的材料制成，如玻璃、不銹鋼等，以確保在不同的工作環(huán)境和壓力條件下能夠穩(wěn)定運(yùn)行。固定相則是實現(xiàn)分離的關(guān)鍵物質(zhì)，它可以是各種類型的材料，如硅膠、聚合物等。固定相的顆粒大小、孔徑分布以及表面性質(zhì)等因素都會對分離效果產(chǎn)生重要影響。接頭用于連接柱管和其他設(shè)備，保證流動相能夠順利地進(jìn)出制備柱，同時防止泄漏。
中低壓制備柱的校準(zhǔn)方法：
1.流動相系統(tǒng)校準(zhǔn)
-流速校準(zhǔn)：使用精密流速計或電子天平測量實際流速，與設(shè)定值對比，誤差應(yīng)≤±2。
-梯度校準(zhǔn)：若涉及梯度洗脫，需驗證不同比例流動相的混合精度，可通過檢測混合后溶液的pH或電導(dǎo)率一致性判斷。
2.檢測器校準(zhǔn)
-波長校準(zhǔn)(若為紫外檢測器)：用鈥玻璃濾光片校正波長準(zhǔn)確性，誤差應(yīng)<±1 nm。
-靈敏度校準(zhǔn)：注入已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品(如萘或苯)，調(diào)整檢測器增益使信號強(qiáng)度與濃度呈線性關(guān)系。
3.柱效恢復(fù)與標(biāo)準(zhǔn)化
-再生處理：長期使用的柱可能因樣品殘留導(dǎo)致性能下降，可用高純度溶劑(如甲醇、丙酮)沖洗。
-標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn)：定期用同一標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)樣，對比保留時間及峰面積變化，若偏差>5則需重新平衡或更換填料。
